研究背景:人B類清道夫受體1（SCARB1）ELISA試劑盒(atherosclerosis AS)的早期階段,指患者無臨床癥狀,但彩色B超證實頸總動脈、股動脈或髂總動脈內(nèi)中膜厚度≥1.0mm和/或有動脈粥樣硬化斑塊出現(xiàn)。2型糖尿病(T2DM)多因素干預(yù)的主要目的之一是預(yù)防亞臨床AS的發(fā)生發(fā)展。B類清道夫受體(scavenger receptor class B,Scarb,SRB)是LDL-c、HDL-c代謝中的重要受體蛋白,包括CD36和B類清道夫受體BⅠ(scavenger receptorclass B typeⅠ,Scarb1,SRB1)兩種。CD36抗原是一種細(xì)胞膜糖蛋白,存在多種配體(如氧化的和乙?；腖DL-c等),參與包括脂質(zhì)代謝和動脈粥樣硬化在內(nèi)的許多生理和病理過程。SRB1是CD36蛋白家族成員,與CD36共享30%的同源序列,為脂蛋白受體中唯一能真正介導(dǎo)細(xì)胞與HDL-c作用的膜受體。 研究目的:對新診2型糖尿病進(jìn)行4年的多因素干預(yù),了解代謝控制狀況及亞臨床AS的發(fā)生情況;通過檢測CD36、SRB1基因多態(tài)性、外周血單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)情況,分析它們與T2DM患者代謝水平及亞臨床AS進(jìn)程的關(guān)系。 第一部分人B類清道夫受體1（SCARB1）ELISA試劑盒多因素干預(yù)研究 目的探討不同方案干預(yù)下新診斷2型糖尿病(T2DM)患者的代謝指標(biāo)控制及亞臨床動脈粥樣硬化(AS)發(fā)生和發(fā)展的情況。 方法采用前瞻性開放研究,將170例(35-70歲)病程1年以內(nèi)、無AS的新診T2DM患者按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組,分別為:A組(強(qiáng)化降糖+降壓治療)、B組(強(qiáng)化降糖+降壓+調(diào)脂治療)、C組(在B組基礎(chǔ)上加服維生素E0.2g/天)及D組(在B組基礎(chǔ)上加服復(fù)方丹參滴丸30丸/天)。共觀察4年,每月隨訪一次,定期復(fù)查空腹血糖(FBS)、餐后2小時血糖(PBS)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、血脂、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、體重指數(shù)(BMI)、腰臀比(WHR)和血管彩超,了解干預(yù)4年的代謝控制情況及其頸總動脈(CCA)、股動脈(FA)內(nèi)中膜厚度(IMT)和/或AS斑塊發(fā)生的進(jìn)展。 結(jié)果①170例患者中,實際完成4年多因素干預(yù)共149例,失訪21例(脫失率12.4%)。②干預(yù)4年結(jié)束時,149例患者HbAlc、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-c)、SBP、DBP水平均較基線顯著下降(p0.01);WHR、HbAlc、TG、TC、LDL-c、SBP、DBP達(dá)標(biāo)率分別為29.5%、54.4%、74.5%、71.1%、73.8%、98.0%和98.7%,較基線顯著提高(p0.01);③共有88例發(fā)生亞臨床AS,發(fā)生率達(dá)59.1%;A、B、C、D四組患者亞臨床AS發(fā)生率分別為69.4%、53.8%、62.2%、51.4%,各組間比較p0.05;④A、B、C、D四組CCA-IMT、FA-IMT均較基線增加,各組與基線比較p均0.01;B、C、D三組干預(yù)4年后低密度脂蛋白(LDL-c)、膽固醇(TC)顯著低于A組(p分別為0.01、0.05)。 結(jié)論多因素強(qiáng)化干預(yù)盡管可使T2DM患者代謝狀況得到很大改善,WHR、HbAlc、TG、TC、LDL-c、SBP、DBP達(dá)標(biāo)率顯著提高,但不能完全阻止大血管病變的發(fā)生,隨著病程的增加,亞臨床AS呈進(jìn)展趨勢。 第二部分清道夫受體B(CD36、及SRB1)基因多態(tài)性與2型糖尿病及其亞臨床動脈粥樣硬化進(jìn)程的關(guān)系 目的探討清道夫受體B基因(CD36及SRB1基因)多態(tài)性與多因素干預(yù)下T2DM亞臨床AS發(fā)生的關(guān)系。 方法采用PCR-RFLP方法檢測470例湖南地區(qū)漢族T2DM患者及220例無糖尿病對照組CD36(CD36-rs1984112、CD36-T620C位點)及SRB1-rs5888基因多態(tài)性,比較它們基因型及等位基因頻率的差異。采用logistic回歸模型分析CD36-1984112及SRB1-rs5888基因型及代謝指標(biāo)對亞臨床AS的影響,預(yù)測多因素干預(yù)下發(fā)生亞臨床AS的影響因素。 結(jié)果①T2DM患者與健康受試者CD36(CD36-rs1984112位點、CD36-T620C位點)基因型及等位基因頻率比較均無顯著性差異(p0.05);SRB1基因型及等位基因頻率在T2DM與對照組間比較差異有顯著性(p0.01),T2DM患者攜帶SRB1-rs5888C/C基因型的頻率低于健康人群(46.6%vs 63.2%,p0.01),攜帶SRB1-C/T的頻率高于健康人群(43.4%vs 30.5%,p0.01),T2DM患者攜帶等位基因T的頻率高于健康人群(31.7%vs 24.5%,p0.01);②將所有攜帶CD36-rs1984112A/A和/或SRB1-rs5888T/T的單倍體型1、2、3、6、9合并為一類(單倍體型A),其他的單倍體型4、5、7、8合并為一類(單倍體型B),兩者比較單倍體型A亞臨床AS的發(fā)病率較B為高(65.4%vs 52.1%,p=0.133);③以亞臨床AS是否發(fā)生(0、1)為因變量做logistic回歸分析顯示,多因素干預(yù)下影響亞臨床AS發(fā)生的因素有3個:年齡(OR值1.103)、LDL-c(OR值2.552)、吸煙(OR值2.242),CD36與SRB1基因型及其交互作用、其他代謝指標(biāo)均未進(jìn)入logistic回歸模型。 結(jié)論①SRB1-rs5888基因型及等位基因頻率在T2DM患者與健康受試者中分布不同,T2DM患者攜帶SRB1等位基因T的頻率高于健康人群。②多因素干預(yù)下,除年齡外,LDL-c和吸煙是亞臨床AS發(fā)生的主要危險因素,CD36及SRB1基因多態(tài)性可能與亞臨床AS進(jìn)程無關(guān)。 第三部分2型糖尿病單核細(xì)胞表面清道夫受體CD36的表達(dá)及其影響因素的分析 目的了解2型糖尿病患者外周血單核細(xì)胞表面CD36的表達(dá)情況,探討影響CD36表達(dá)的有關(guān)因素及CD36表達(dá)與亞臨床AS的關(guān)系。 方法采用PCR-RFLP方法檢測102例湖南地區(qū)漢族T2DM患者和8例健康受試者CD36-1984112及SRB1-rs5888基因多態(tài)性,采用密度梯度離心法分離T2DM患者和健康受試者外周血單個核細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測單核細(xì)胞表面CD36蛋白表達(dá)熒光強(qiáng)度,比較T2DM無AS組、T2DM亞臨床AS組及健康對照組CD36的表達(dá)。多元線性回歸分析CD36表達(dá)的影響因素。Logistic回歸分析多因素干預(yù)下亞臨床AS與CD36表達(dá)的關(guān)系。 結(jié)果T2DM亞臨床AS組外周血單核細(xì)胞CD36的平均熒光強(qiáng)度(MFI)高于T2DM無AS組(1382.23±658.69 vs 1173.02±339.71道數(shù),p=0.047)。CD36高表達(dá)組SBP較低表達(dá)組為低,p=0.020,校正年齡后,p=0.010。多元線性回歸分析顯示,影響T2DM患者CD36表達(dá)的因素有:年齡(p=0.005)、性別(p=0.021)、SBP(p=0.027),標(biāo)化偏回歸系數(shù)分別為0.28、0.31、-0.21;男、女性T2DM患者分別做多元線性回歸分析,影響男性CD36表達(dá)的因素為年齡(p=0.002);影響女性CD36表達(dá)的因素為DBP(p=0.001)。以是否存在亞臨床AS(0、1)為因變量,以CD36單核細(xì)胞表面表達(dá)的熒光強(qiáng)度等指標(biāo)作為自變量做logistic回歸,留在方程的因素是年齡(p=0.004)、LDL-c(p=0.095),CD36-MFI未進(jìn)入方程。 結(jié)論①T2DM亞臨床AS組外周血單核細(xì)胞表面CD36表達(dá)較無AS組高。②年齡、性別、SBP是CD36表達(dá)的影響因素,增齡、男性、低的SBP可使CD36表達(dá)增加;影響男性CD36表達(dá)的主要因素是年齡;影響女性CD36表達(dá)的因素主要為DBP,DBP越低,CD36的表達(dá)越高。人B類清道夫受體1（SCARB1）ELISA試劑盒